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本文主要針對以下幾個常見的亞細胞架構(gòu)：細胞膜、細胞質(zhì)、細胞骨架，為大家介紹如何選擇合適的試劑/探針分別對它們進行染色。

利用熒光染料對細胞膜進行標(biāo)記和示蹤的成像技術(shù)是研究細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的重要手段。

DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，專門用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。該系列染料進入細胞膜后，會在整個細胞膜上側(cè)向擴散，在最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們與細胞膜結(jié)合后熒光強度會大大增強，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命，高熒光強度至少維持在30天，甚至長達2年以上。

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨特?zé)晒忸伾珵榛罴毎亩嗌上窈土魇郊毎治鎏峁┝吮憷墓ぞ摺?/span>

DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過濾器一起使用。

DIO染料聚合物在3D腫瘤球體中的標(biāo)記

DiI染料標(biāo)記雞胚胎神經(jīng)嵴細胞

DiD被633 nm He-Ne激光器激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射波長，為標(biāo)記具有顯著內(nèi)在熒光的細胞和組織提供了有價值的替代方案。DID染料的染色效率高，均一，不易猝滅，無明顯細胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DID已成功應(yīng)用于多種細胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細胞、間充質(zhì)干細胞、腫瘤細胞、造血干細胞等。

DID染色效率的激光共聚焦掃描成像圖

DiR發(fā)出的紅外光可以通過細胞和組織的有效傳輸以及紅外范圍內(nèi)的低水平自發(fā)熒光，可用于體內(nèi)成像或示蹤。

細胞質(zhì)是細胞質(zhì)膜以內(nèi)、細胞核以外的部分。細胞質(zhì)基質(zhì)是指細胞質(zhì)去除細胞器之外的部分，呈現(xiàn)膠質(zhì)狀態(tài)。是正常細胞進行生命活動的主要場所，正常狀態(tài)下為透明的膠狀物，內(nèi)含細胞新陳代謝所需的多種營養(yǎng)物質(zhì)，由水、無機鹽、脂質(zhì)、糖類、氨基酸、核苷酸和多種酶組成。

Calcein AM/6-CDCFDA 都是一種可對活細胞進行熒光標(biāo)記的細胞染色試劑。

原理相似：Calcein AM/6-CDCFDA能夠輕易穿透活細胞膜，進入到細胞質(zhì)后，酯酶會將其水解留在細胞內(nèi)，發(fā)出強熒光。因為其細胞毒性低，是最適合作為活細胞的熒光探針。

而Lucifer Yellow Cadaverine 通常作為可固定的熒光示蹤劑。Lucifer Yellow Cadaverine 可以標(biāo)記細胞中的內(nèi)吞噬泡。由于其水溶解度高、熒光明亮、細胞毒性低，并且具有較寬的Stokes shift，我們可以在固定和活細胞中觀察內(nèi)吞噬泡。此外，它還可以用于結(jié)合羧酸基團。

細胞骨架指真核細胞質(zhì)中與保持細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和細胞運動有關(guān)的蛋白質(zhì)纖維網(wǎng)架體系(包括微管、微絲、中間絲)。主要參與維持細胞形狀、細胞運動、細胞內(nèi)物質(zhì)運輸、染色體分離和細胞分裂等重要生命活動。

微絲呈細絲狀，在細胞中成束排列，其主要成分是肌動蛋白，絲狀肌動蛋白（F-actin）是肌動蛋白多聚體，由肌動蛋白單體（G-actin）形成。

微絲在細胞生命活動中有許多重要功能。

鬼筆環(huán)肽是從致命的鵝膏菌（Amanita phalloides）蘑菇中分離的毒素，是一種雙環(huán)肽，能與F-actin特異性結(jié)合。當(dāng)用熒光染料標(biāo)記時，可以顯示微絲骨架在細胞中的分布，它是研究F-肌動蛋白分布的非常方便的工具。熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養(yǎng)細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標(biāo)記方法。

產(chǎn)品特點 ： 

多種顏色可選擇，熒光亮度高，光穩(wěn)定性好，適合做顯微鏡檢測。
親和力高：平均每個 F - actin 亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子。

特異性強：特異性結(jié)合于 F - actin，而不與 G - actin 結(jié)合。

優(yōu)于抗體染色：與 F - actin 的結(jié)合親和力在不同物種間無顯著變化。

靈敏度高：納摩爾濃度 (nM) 染色即可滿足實驗要求。

適用范圍廣：無物種差異性，也適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。