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百瑞極——常見細胞器染料分享(4)

常見細胞器染料分享(4)


本文主要針對高爾基體、溶酶體及神經元細胞,為大家介紹如何選擇合適的試劑/探針分別對它們進行染色。


01

高爾基體檢測


高爾基體是真核細胞中內膜系統的組成之一。為意大利細胞學家卡米洛·高爾基于1898年首次用硝酸銀染色的方法在神經細胞中發現。是由光面膜組成的囊泡系統,它由扁平膜囊(saccules)、大囊泡(vacuoles)、小囊泡(vesicles)三個基本成分組成。


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高爾基體功能

高爾基體的主要功能將內質網合成的蛋白質進行加工、分揀、與運輸,然后分門別類地送到細胞特定的部位或分泌到細胞外。高爾基體是完成細胞分泌物(如蛋白)最后加工和包裝的場所。


從內質網送來的小泡與高爾基體膜融合,將內含物送入高爾基體腔中,在那里新合成的蛋白質肽鏈繼續完成修飾和包裝。高爾基體還合成一些分泌到胞外的多糖和修飾細胞膜的材料。


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高爾基體染料


內質網(ER)和高爾基體主要負責(細胞內脂質和蛋白質的分類),因此,針對這兩個細胞器的大部分染色探針都是脂質或是可以影響蛋白質運動的化學物質。在活細胞和固定細胞中,ER和高爾基體的扁平膜囊可以用各種親脂探針進行染色,然后根據其形態進行區分。


NBD C6-Ceramide是一種熒光鞘脂類似物,可用于研究鞘脂轉運和代謝機制。它還可以用于選擇性染色活細胞和固定細胞中的高爾基體。環境敏感的NBD染料在水中發出微弱的熒光,但在非質子溶劑和其他非極性環境中熒光增加。


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02

溶酶體檢測


溶酶體(Lysosomes)是動物細胞中重要的細胞器, 其存在的完整性與動物生理病理均密切相關。溶酶體是真核細胞中為單層膜所包圍的細胞質結構,內部pH 4~5,含豐富的水解酶,具有細胞內的消化功能。新形成的初級溶酶體經過與多種其他結構反復融合,形成具有多種形態的有膜小泡,并對包裹在其中的分子進行消化。因此,溶酶體具有溶解或消化的功能,為細胞內的消化器官。

溶酶體成分


含有兩類維持結構和功能所必需的蛋白質:執行消化功能的可溶性溶酶體水解酶和具有更復雜功能的溶酶體膜蛋白。


約60種酸性水解酶,包括蛋白酶、脂肪酶、核酸酶,需要由ATP驅動的質子泵與其他離子通道合作來維持酸性環境(pH~4.5)才能發揮作用。


多種溶酶體膜蛋白,例如LAMP1,LAMP2,LIMP2,v-ATPaes和ASM。其中,LAMP1和LAMP2是最豐富的溶酶體膜蛋白,對代謝、生物發生、信號轉導和細胞穩態至關重要。

溶酶體功能


溶酶體的主要作用消化作用,是細胞內的消化器官,細胞自溶,防御以及對某些物質的利用均與溶酶體的消化作用有關。


細胞內消化:對高等動物而言細胞的營養物質主要來源于血液中的水分子物質,而一些大分子物質通過內吞作用進入細胞,如內吞低密脂蛋白獲得膽固醇,對一些單細胞真核生物,溶酶體的消化作用就更為重要了。


細胞凋亡:個體發生過程中往往涉及組織或器官的改造或重建,如昆蟲和蛙類的變態發育等等。這一過程是在基因控制下實現的,稱為程序性細胞死亡,注定要消除的細胞以出芽的形式形成凋亡小體,被巨噬細胞吞噬并消化。


自體吞噬:清除細胞中無用的生物大分子,衰老的細胞器等,如許多生物大分子的半衰期只有幾小時至幾天,肝細胞中線粒體的平均壽命約 10 天左右。


防御作用:如巨噬細胞可吞入病原體,在溶酶體中將病原體殺死和降解。


參與分泌過程的調節,如將甲狀腺球蛋白降解成有活性的甲狀腺素。


形成精子的頂體:頂體相當于一個化學鉆,可溶穿卵子的皮層,使精子進入卵子。


溶酶體染料

FluoLysoTM 探針是一種用于活細胞溶酶體特異性標記的熒光探針,本品濃度為 1 mM。FluoLysoTM 探針可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中,從而實現對于溶酶體的特異性熒光標記。FluoLysoTM 探針適用于活細胞染色,但不適合用于固定后細胞的染色。


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03

神經元檢測


神經元,也稱為neurone或神經細胞,是一種可電興奮的細胞,通過稱為突觸的特殊連接與其他細胞通信。它是神經組織的主要成分。除海綿和平口類動物之外的所有動物都有神經元,但其他多細胞生物如植物則沒有。


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神經元的類型


感覺神經元對影響感覺器官細胞的觸覺,聲音或光等刺激作出反應,并向脊髓或大腦發送信號。


運動神經元接收來自大腦和脊髓的信號,以控制從肌肉收縮到腺體輸出的一切。


中間神經元將神經元連接到大腦或脊髓的同一區域內的其他神經元。一組連接的神經元被稱為神經回路。

神經元的結構


突起:分為樹突與軸突兩部分

樹突:較短,分支較多,直接細胞體擴張突出形成樹枝狀,作用接受其他神經元傳來的沖動,并傳給細胞體

軸突:較長,每個神經元只有一個軸突,軸突末端有分支,能夠傳導細胞體發出的神經沖動

髓鞘:軸突的外圍,對于神經具有保護作用

細胞體:神經元主要結構,由細胞膜,細胞核,細胞質組成,具有聯絡,整合、輸入信息,傳出信息的作用。

神經末梢: 神經纖維末端細小的分支,分布于全身各處


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信息的傳遞方向:樹突→細胞體→軸突→下一個神經元

長的突起大都套有一層鞘,組成神經纖維。


信號傳輸過程部分是電氣的,部分是化學的。由于維持其膜上的電壓梯度,神經元是可電激發的。如果電壓在短時間內變化足夠大的量,則神經元產生稱為動作電位的全有或全無電化學脈沖。這種潛力沿著軸突快速傳播,并在到達它們時激活突觸連接。突觸信號可以是興奮性的或抑制性的,增加或降低到達體細胞的凈電壓。

神經元染料


神經末梢探針是一系列陽離子型苯乙烯基熒光染料,用于跟蹤神經肌肉連接或突觸的突觸活動。這類染料通常具有親脂性尾部(兩個碳鏈)和帶陽離子的高親水性頭部。


陽離子苯乙烯基染料是通過活性依賴性染色突觸小泡來發揮功能。染料與細胞或組織共孵育時,染料的水相部分沒有熒光,而染料的親脂性尾部插入細胞膜并呈現強熒光。神經刺激后,在進行胞吞作用時,染料被包裹在囊泡內,因此,洗去細胞表面附著的染料后,熒光信號強弱表示新形成的囊泡的數量的多少。反之,在胞吐作用時,染料與神經遞質一起從囊泡釋放,導致熒光信號減少。因此,熒光強度的變化反映了胞吞/胞吐或突觸活動的情況。內吞過程中熒光增加的速率——“結合速率”和胞吐過程中熒光減少的速率 ——“解離速率”因染料種類而異。通常,具有較長親脂性尾部和更多雙鍵的染料對膜具有較高的親和力,因此具有較高的結合速率和較低的解離速率。


NerveRed 系列探針是具有三個雙鍵的染料。

NerveGreen 系列探針是具有單個雙鍵的染料。

NerveGreen C4(FM1-43)是一種廣泛使用的綠色熒光染料,通過染色突觸的突觸囊泡或神經肌肉接頭來跟蹤突觸活動。結合使用紅色熒光染料 NerveRed,突觸和神經肌肉接頭可以獨立兩個顏色成像。


NerveRed/Green系列探針不能用于固定細胞染色。


NM 染料具有與NerveRed/Green系列探針相似的結構,此外,它們在帶正電的頭部具有醛固定胺,可用于固定細胞的染色。


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Hydroxystilbamidine(也稱為FluoroGold)已被廣泛用作神經元的逆行示蹤劑和組織化學染色劑。FluoroGold可以進行逆行軸突運輸,它顯示出大量的枝晶填充物,并且具有很高的抗褪色性。


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※ 本頁面產品僅供研究用,研究以外不可使用。

 

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