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BN16002-50T
50T
￥1060.00
BN16002-100T
100T
￥1600.00
產品描述
產品規格：50T，100T
產品內容：
儲存條件 4℃避光冷藏，請勿凍存。有效期見外包裝。
光譜特性
YF488-Annexin V: Abs/Em =490/515 nm
PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)
產品介紹
YF488-Annexin V 和 PI 凋亡試劑盒提供了一種快速 簡便的方法，通過標記早期凋亡細胞（綠色）和壞死細胞（紅 色），用于檢測細胞凋亡水平。產品可以使用流式細胞儀或其它熒光檢測設備進行檢測。
YF488-Annexin V 可以標記凋亡細胞。Annexin V 選擇 性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱 PS)。在細胞 發生早期凋亡時，PS 會外翻到細胞表面，即細胞膜外側。用綠色熒光探針 YF488 標記的 Annexin V，即 YF488 -Annexin V，可以結合外翻的磷酯酰絲氨酸，從而檢測細胞凋亡的重要特征。我們公司的 YF488 染料與熒光素/FITC 相比，熒光亮度更高，且不受環境中 pH 的影響，具有良 好的光穩定性。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種 DNA 結合染 料，它可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞的細胞核。PI 可以由 488, 532 或 546 nm 的激光激發， 呈現紅色熒光。
使用方法
下列實驗方案以利用星形孢菌素誘導 Jurkat 細胞凋亡 為例， 如果使用其他誘導劑和其他類型的細胞，實驗條件 需要略作調整。
一、流式細胞檢測
1. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處 理的細胞樣品，作為陰性對照。此外，設定一組樣品做單染， 用于調節補償。
2. 收集細胞。懸浮細胞：300 g，4℃離心 5 min 收集細胞； 貼壁細胞：用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g，4℃離心 5 min收集細胞，胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。
注：用胰蛋白酶消化然后使細胞在最佳細胞培養條件和培養 基中恢復約30分鐘，然后再染色。 胰蛋白酶消化會暫時破 壞質膜，允許Annexin V結合磷脂酰絲氨酸在細胞膜的細胞 質表面上，從而導致假陽性染色。
3. 用預冷的PBS 洗滌細胞兩次，每次均在 300 g，4℃下離 心 5 min，收集 1-5×105 個細胞并用100 μL 1×結合緩沖液 重懸細胞。
4. 每管加入 4-5 μL 的YF488 -Annexin V 和 5 μL 的 PI工 作液。
注：我們推薦準備兩管額外的流式管，每管中只加入一種單染 染料（YF488-Annexin V 和PI），用于流式單染的補償調 節。
5. 室溫避光孵育 10-15 min，為避免細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上操作。
6. 每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×結合緩沖液，盡快通過 流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。YF488-Annexin V 由 488 nm 激光激發，檢測熒光發射光譜在530 nm 處（FITC 通道）， PI 通道發射光譜約在 617 nm 處（注：PBS 或 1×結合 緩沖液的選擇根據不同凋亡處理以及不同細胞具體選擇）。
二、熒光顯微鏡檢測
對于懸浮細胞，可參照流式細胞檢測的方法進行具體操作。
1. 在蓋玻片或載玻片小室中接種細胞。
2. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作為陰性對照。
3. 用PBS 洗滌細胞。
注：細胞收集后如果不用 PBS 清洗，可以用含血清的培養基直接替代Annexin V 結合緩沖液，但是 Annexin V 的使用濃度需要重新優化。
4. 每 100 μL 的 1× Annexin V 結合緩沖液中加入 5-25 μL的YF488 -Annexin V 和 5 μL 的PI。
注：最佳使用濃度由具體實驗要求確定。
5. 向培養板中加入足量的染液以覆蓋全部細胞，室溫避光孵育 15-30 min。為避免細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上操作，但孵育時間至少延長至 30 min。
6. 用 1×結合緩沖液清洗細胞。
7. 將孵育有細胞的蓋玻片置于載玻片上，載玻片可提前加 一滴 1×結合緩沖液；對于培養在小室內的細胞，可直接加入足量的 1×結合緩沖液覆蓋細胞。
8. 使用合適的濾光片觀察細胞。YF488 -Annexin V 可用 FITC 適用的濾光片，PI 可用 Cy3 或者 Texas。
注意事項： 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注 意避光，以減緩熒光淬滅。
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